Справочник

Мук определение чувствительности к антибиотикам

Поиск Лекций

Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам

Определение чувствительности микроорганизмов – возбудителей инфекционных заболеваний человека к антибактериальным препаратам (АБП) приобретает все более важное значение в связи с появлением и широким распространением антибиотико – устойчивости у бактерий. Стандартные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП были разработаны во второй половине 60-х – начале 70-х годов XX века и с тех пор с методической точки зрения не претерпели принципиальных изменений.

Исследования чувствительности микроорганизмов к АБП осуществляются для решения следующих задач:

— обоснование целенаправленной индивидуальной антибактериальной терапии, для лечения конкретной инфекционной болезни отдельным пациентам .

— обоснование эмпирической (проверенной) терапии отдельных нозологических формах инфекционных болезней в пределах лечебных учреждений или географических регионов.

— осуществление наблюдения за распространением антибиотико – устойчивости в отдельных учреждениях или географических регионах.

— исследование новых химических соединений на наличие антибактериальной активности.

В ходе повседневной деятельности в бактериологических лабораториях из различных биологических материалов и объектов внешней среды выделяют множество бактерий, относящихся к различным таксономическим группам. Однако определение чувствительности выделенных микроорганизмов к АБП показано далеко не во всех случаях. Определение показаний для исследования чувствительности микроорганизмов к АБП является обязанностью врача – бактериолога.

Обязательному исследованию на чувствительность к АБП подлежат все микроорганизмы, выделенные из первично стерильных жидкостей, органов и тканей человека. В остальных случаях оценке чувствительности должна предшествовать оценка клинической значимости. Исследованию по оценке чувствительности к антибиотикам подлежат чистые культуры микроорганизмов или материал изолированных колоний с плотных питательных сред после первичного посева образца клинического материала, в последнем случае параллельно необходимо провести идентификацию культуры.

Прямое определение чувствительности с использованием клинического материала (без выделения чистой культуры) возможно только в исключительных случаях при условии подтверждения однородности культуры и высокой степени обсемененности при окраске по Граму, причем исследование следует повторить после выделения чистой культуры микроорганизма.

По степени чувствительности к антимикробным препаратам микроорганизмы разделяют на три группы: чувствительные (S), промежуточные (I) и устойчивые (R). Есть два подхода к значению этих понятий. Клинический подход рассматривает оценку эффективности антибактериальной терапии. В соответствии с этим, к чувствительным относят штаммы возбудителя, рост которых в организме больного прекращается при введении обычных терапевтических доз антибиотика. К промежуточным относятся штаммы, для подавления, роста которых требуется назначение максимально допустимых доз антимикробного препарата. К устойчивым относят штаммы, для подавления, роста которых требуются очень высокие дозы антибактериального препарата, которые при данной концентрации могут привести к токсическому эффекту в организме. Микробиологический подход к разделению понятий основан на анализе концентраций антибиотика в питательной среде.

Следует уделять особое внимание определению чувствительности микроорганизмов, относящихся к таксономическим группам, для которых характерна высокая частота распространения приобретенной устойчивости. У микроорганизмов, проявляющих универсальную чувствительность каким – либо АБП, т.е. когда случаев устойчивости не описано (например, Streptococcus piogenes – все штаммы чувствительны к пенициллину), проводить определение чувствительности к этим препаратам в повседневной практике нецелесообразно.

Способы определения чувствительности бактерий к лекарственным препаратам

Современные стандартизированные методы определения чувствительности микроорганизмов к АБП подразделяют на методы серийных разведений и диффузионные.

Рассмотрим диско — диффузионный метод (ДДМ). Этот метод является простым, удобным и широко используемым при микробиологическом исследовании чувствительности. Он основан на диффузии АБП из носителя в плотную питательную среду и подавления роста исследуемой культуры в той зоне, где концентрация АБП превосходит минимальную концентрацию, подавляющую видимый рост исследуемого микроорганизма на плотной среде (МПК). В диско — диффузионном методе в качестве носителя АБП используют бумажный диск, пропитанный определенным количеством антибиотика, помещаются на поверхность инокулированного агара, чашка инкубируется в течении определенного времени, затем измеряются диаметры зон подавления роста вокруг дисков с антибиотиками. Образование зоны подавления роста происходит в результате диффузии АБП из носителя в питательную среду. В определенных пределах величина диаметра зоны подавления роста обратно пропорциональна МПК. Однако диско – диффузионный метод позволяет лишь косвенно о величине МПК, а результатом исследования является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности (чувствительный, промежуточный или устойчивый).

Для определения чувствительности ДДМ следует использовать только стандартизированные качественные диски. Необходимо строго соблюдать правила хранения и использования коммерческих дисков, для получения правильных результатов, в противном случае содержание в них антибиотиков может снизиться ниже допустимого уровня (прежде всего в результате увлажнения) еще до истечения срока годности. Долговременное хранение дисков с АБП осуществляют в герметичной упаковке в морозильной камере при температуре — 18ºС и ниже. Небольшие партии дисков, используемые в повседневной работе можно хранить в холодильнике при температуре + 4 — +8 ºС.

©2015-2018 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных

Способ определения чувствительности патогенных бактерий к комплексным антибактериальным препаратам

Все о резистентности и методах определения чувствительности бактерий к антибиотикам

» Все об антибиотиках

Мук определение чувствительности к антибиотикам 2014

Мук определение чувствительности к антибиотикам

2. Общие сведения

3. Показания для исследования чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам

4. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам

4.1. Общая характеристика методов

4.2. Методы серийных разведений

4.3. Диско-диффузионный метод (ДДМ)

5. Контроль качества определения чувствительности

5.1. Контроль чистоты роста культуры

5.2. Контроль качества питательных сред

5.3. Интегральный контроль качества определения чувствительности

5.4. Хранение контрольных штаммов

5.5. Частота проведения контроля качества

6. Определение чувствительности отдельных групп бактерий к антибактериальным препаратам и интерпретация результатов

6.1. Принципы выбора АБП для тестирования различных видов микроорганизмов и интерпретации результатов

6.2. Определение чувствительности представителей семейства Enterobacteriaceae

6.3. Определение чувствительности Р. aeruginosa, Рseudomonas sрр., Асinetobacter sрр. и других неферментирующих бактерий (НФБ)

6.4. Определение чувствительности Staphylococcus sрр.

6.5. Определение чувствительности Enterococcus sрр.

6.6. Определение чувствительности микроорганизмов со сложными питательными потребностями

6.7. Определение чувствительности Streptococcus sрр.

6.8. Определение чувствительности Haemophilus spp.

6.9. Определение чувствительности Neisseria gonorrhotae

7. Эпидемиологический надзор за резистентностью к антимикробным препаратам

Приложение 1. Используемые сокращения

Приложение 2. Таблицы 1 — 10

Приложение 3. Таблицы 11 — 19

Приложение 4. Таблицы 20 — 23

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии

Кафедра микробиологии и химиотерапии Российской медицинской академии последипломного образования

Научно-исследовательский институт антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии

Мук определение чувствительности к антибиотикам

2. Общие сведения

3. Показания для исследования чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам

4. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам

4.1. Общая характеристика методов

4.2. Методы серийных разведений

4.3. Диско-диффузионный метод (ДДМ)

5. Контроль качества определения чувствительности

5.1. Контроль чистоты роста культуры

5.2. Контроль качества питательных сред

5.3. Интегральный контроль качества определения чувствительности

5.4. Хранение контрольных штаммов

5.5. Частота проведения контроля качества

6. Определение чувствительности отдельных групп бактерий к антибактериальным препаратам и интерпретация результатов

6.1. Принципы выбора АБП для тестирования различных видов микроорганизмов и интерпретации результатов

6.2. Определение чувствительности представителей семейства Enterobacteriaceae

6.3. Определение чувствительности Р. aeruginosa, Рseudomonas sрр., Асinetobacter sрр. и других неферментирующих бактерий (НФБ)

6.4. Определение чувствительности Staphylococcus sрр.

6.5. Определение чувствительности Enterococcus sрр.

6.6. Определение чувствительности микроорганизмов со сложными питательными потребностями

6.7. Определение чувствительности Streptococcus sрр.

6.8. Определение чувствительности Haemophilus spp.

6.9. Определение чувствительности Neisseria gonorrhotae

7. Эпидемиологический надзор за резистентностью к антимикробным препаратам

Приложение 1. Используемые сокращения

Приложение 2. Таблицы 1 — 10

Приложение 3. Таблицы 11 — 19

Приложение 4. Таблицы 20 — 23

Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии

Кафедра микробиологии и химиотерапии Российской медицинской академии последипломного образования

Научно-исследовательский институт антимикробной химиотерапии Смоленской государственной медицинской академии

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

Наиболее прост и доступен метод определения чувствительно­сти с помощью дисков, пропитанных антибиотиками. В стерильные чашки Петри, расположенные на горизонтальной поверхности, раз­ливают по 15 мл плотной питательной среды (чаще всего 2% агар на переваре Хоттингера, содержащий 0,11—0,13% аминного азота). На поверхность застывшего и слегка подсушенного агара наливают 1 мл суспензии суточной культуры микроба-возбудителя или, если чистая культура не выделена, взятого для исследования патологи­ческого материала (гной, экссудат и т. п.), слегка разведенного изо­тоническим раствором хлорида натрия. Бактериальную взвесь равно­мерно распределяют по поверхности агара, а ее избыток удаляют пастеровской пипеткой. На поверхности засеянного агара пинцетом раскладывают диски с антибиотиками — по 5—6 дисков на каждую чашку на расстоянии 25 мм от центра чашки. Чашки выдерживают при 37°С 16—18 ч, после чего учитывают результаты опыта путем измерения зон задержки роста микробов вокруг дисков, включая диаметр самого диска. Размер зон зависит от степени чув­ствительности возбудителя к данному антибиотику. При зоне диа­метром до 10 мм штамм расценивается как устойчивый, 11–15 мм — как малочувствительный, 15–25 мм — как чувствительный. Зоны, превышающие 25 мм, свидетельствуют о высокой чувстви­тельности микроорганизма к данному антибиотику. Однако этот метод нельзя считать количественным.

Если порошок антибиотика расфасован не мерно, и на этикет­ке указано количество единиц активности в 1 мг, необходимо к точной навеске препарата (20—25 мг), сделанной на аналитических весах, добавить равный объем растворителя, т. е. получить раствор мг/мл, в 1 мл которого содержится столько единиц, сколько их было указано на этикетке. Из этого основного раствора делают дальнейшие разведения по указанной выше схеме. Суточную ага­ровую культуру испытуемого микроба смывают изотоническим раствором хлорида натрия и, определив густоту взвеси по стандарту мутности, разводят до густоты 10000 микробов в 1 мл. Полученную взвесь по 0,2 мл вносят во все пробирки ряда, начиная с контроль­ной. Таким образом, во всех пробирках содержится в 1 мл 1000 микроорганизмов. Результаты опыта учитывают после инкуба­ции при 37°С в течение 18—20 ч. Последняя пробирка с прозрач­ным бульоном при наличии густого роста в контроле определяет минимальную, подавляющую рост данного микроорганизма концен­трацию антибиотика.

Выделение и практическое использование веществ антибиотиче­ской природы основано на взаимоотношениях между микроорга­низмами разных видов.

В настоящее время обнаружены также и антимикробные ве­щества, действующие внутри одного вида, что и отличает их от антибиотиков.

Комментариев пока нет!

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *